Đề tài thực hiện nhằm chuẩn hóa phương pháp ly trích ADNt ừmô thậncủa cá
tra theo phương phápcủa T aggart et al. (1992) vàtối ưu hóa phương pháp
PCR phát hiện E. ictaluri.
Qui trình ly trích ADN được chuẩn hóa có thời gianthực hiệnbằng 1/8lần qui
trìnhgốc (T aggart et al, 1992)với hàmlượng Proteinase Ksửdụng là 2.5ml
(40mg/ml), thời gian ủ ởbước 1 là 15 phút; hàmlượng RNase là 2.5ml
(2mg/ml), thời gian ủbước 2 là 30 phút.
Qua thí nghiệm xác định được độ nhạy đốivới ADN chiết tách trực tiếptừ
thận có hàmlượng là 50ng,với ADN chiết táchtừ vi khuẩn có hàmlượng 0.2
ng.Hai đoạnmồi EiFd-1 và EiRs-1 được xác định là đặc hiệuvới vi khuẩn E.
ictaluri. Ngoài ra trong quá trình chuẩn hóa thay đổi hàmlượng T ag DNA
polymerasetừ 5U/ml xuống còn 3U/ml.
Thực hiện phản ứng PCRvới ADN được chiết tách trực tiếptừ thậnvới qui
trình đã đượctối ưu, phương pháp PCR đãchuẩn hóa phát hiện E. ictaluri ởvị
trí407bp.
